抗CD44纳米抗体制备与鉴定

　　急性髓系白血病（AML）是一种异质性血液癌症，目前主要的治疗方法是化疗和骨髓干细胞移植，但化疗的特异性和配型的成功率均较低，因而患者的治愈者并不高。基于此，已有对于AML治疗的新型小分子靶向药物和免疫靶向药物的研究，可通过靶向AML细胞提高患者的治愈者和整体生存率。研究表明，CD44在AML细胞表面高表达，且参与AML干细胞的发生和发展，并已有靶向AML细胞表面分子CD44的治疗性抗体的研究。但是，传统单克隆抗体制备过程繁琐，且人源化过程复杂，故难以将理论研究转化到实际应用。因此，本课题选择CD44作为靶标，并筛选易人源化的纳米抗体，为进一步研制新一代治疗AML的靶向性药物奠定基础。

　　抗CD44纳米抗体制备研究方法：

　　1.CD44胞外结构域抗原的制备：构建CD44原核表达载体，转化到大肠杆菌BL21菌株中，通过包涵体复性的方式制备抗原，并进行SDS-PAGE和ELISA分析。

　　2.抗CD44纳米抗体的噬菌体文库构建：将表达的CD44抗原对健康双峰驼进行免疫，通过细胞分离，总RNA提取以及PCR等方法将编码纳米抗体的核酸序列连接到噬菌体载体上，构建抗CD44纳米抗体的噬菌体文库。

　　3.抗CD44纳米抗体的筛选：利用噬菌体展示纳米抗体和固相抗原的结合，通过数轮的“结合-洗脱-结合”后富集特异性结合的噬菌体，之后进行菌液ELISA和序列分析，从而获得抗CD44的纳米抗体。

　　4.抗CD44纳米抗体的表达纯化以及特异性和活性的初步研究：构建抗CD44纳米抗体的表达载体，转化到大肠杆菌WK6菌株中，经过镍亲和层析和分子筛进行纯化；通过ELISA方法对抗CD44纳米抗体的特异性和活性进行初步鉴定。