噬菌体筛选技术的核心在于将外源基因插入噬菌体的结构基因中,使其随着噬菌体的传代而表达。在不影响噬菌体外壳蛋白正常功能的前提下,外源蛋白以融合形式展示在噬菌体表面。这种展示方式使得外源蛋白能够保持其相对独立的空间构象和生物活性,有利于靶分子的特异性识别及结合。
噬菌体筛选策略对于获得高亲和力的抗体至关重要。常见的筛选策略包括负向筛选、竞争筛选和交叉筛选等。
1.用于去除非特异性结合的克隆。例如,在使用链霉亲和素磁珠对生物素化蛋白进行筛选之前,可以将文库预先与链霉亲和素磁珠和生物素化非目标蛋白结合,以减少不需要的结合物的比例。
2.在靶抗原和非靶抗原同时存在的情况下进行筛选,增加结合靶抗原特异性表位的抗体比例。
3.在不同轮次之间交替使用抗原进行筛选,以得到具有交叉反应的抗体。
噬菌体筛选的主要应用领域:
1.抗原表位分析:通过噬菌体展示技术可以筛选出抗原的表位,为疫苗设计和免疫治疗提供重要信息。
2.单克隆抗体的制备:利用噬菌体展示技术可以快速获得高亲和力的单克隆抗体,用于疾病诊断和治疗。
3.抗体人源化:通过该技术可以获得人源化抗体,减少异源抗体在临床应用中的免疫排斥反应。
4.药物筛选:噬菌体展示技术可用于筛选新的药物候选分子,特别是在治疗性抗体的开发中发挥重要作用。
5.疫苗研制:通过筛选具有高亲和力和高特异性的抗原表位,可以设计出更有效的疫苗。