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ARTICLES凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密,不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖,必须将现有的组织块充分散开,使细胞解离出来。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。分为夹心法,间接法和竞争法三种。
ChiRP(Chromatin Isolation by RNA Purification )是一种检测与RNA绑定的DNA和蛋白相互作用的方法。该方法是通过设计生物素或链霉亲和素探针,把目标RNA拉下来以后,与其共同作用的DNA染色体片段就会附在到磁珠上,后通过qRT-PCR、测序、免疫印迹法和质谱分析等确定目的RNA、DNA和RNA结合蛋白(RBPs)。
研究DNA结合蛋白与其靶DNA之间相互作用的主要实验手段之一。原理及流程如下: 链亲和素磁珠能够与生物素标记DNA/蛋白复合物结合。在磁场下或通过离心使结合物与上清液分离,吸弃上清液并洗涤磁珠,然后用SDS样品液使蛋白变性而与磁珠分离。分离液中的蛋白质用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)或双向电泳分离,SDS PAGE用高灵敏度考马斯亮蓝(CBB)染色。然后从染色胶上切下所需蛋白带进行质
RNA pull down实验 检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间的相互作用。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
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